rat Collagen 1

· Beschreibung

ratCollagen 1 von CELL CONCEPTS ist ein besonders hochwertiges ECM-Substrat. Es wird direkt als Fibrille unter Erhalt der natürlichen Ketten-Struktur steril präpariert und erfährt keine artifizielle Veränderung durch chemische Einflüsse wie etwa bei Extraktionsverfahren oder anderen Methoden.

Als Hauptbestandteil der Extra-Zellulären-Matrix eignet sich Collagen 1 besonders gut für die Kultur nahezu aller Zelltypen und Gewebe. Es unterstützt ihre Anheftung an ein natürliches Substrat mit den für das „Signaling“ wichtigen Anheftungs-“Repeats“. Die Proliferation, Differenzierung und Langzeit-Kultur u.a. in der 2- bzw. 3-dimensionalen Co-Kultur mit verschiedenen Zelltypen, die sich brauchen, ist so problemlos durchführbar. Collagen erlaubt das Design individueller, gegeneinander abgegrenzter Micromillieus durch Zugabe weiterer Faktoren und ECM-Proteine. Dort findet Collagen nativ oder vernetzt Verwendung zum Aufbau dreidimensionaler Gele oder zur Beschichtung von Membranen zur Simulation von "Gewebestrukturen".

ratCollagen 1 eignet sich ebenfalls als Zusatz zu Serum-freien Medien, um die Produktion weiterer gewebetypischer Matrixproteine und / oder Faktoren zu stimulieren. Es dient in der Zellkultur von spezialisierten Zellen hervorragend der Erhaltung des Proliferations-, Differenzierungs- und Physiologiestatus im Zellzyklus (z.B. "Repair" und/oder Erholung primärer Explantate).

CELL CONCEPTS bietet ratCollagen 1 als sterilpräpariertes natives Protein in der 10 ml Einheit an als:

6 mg/ml sterile Lösung, in 0,1% Essigsäure, ungepuffert, pH 3,45

Präparationsansätze im Liter-Maßstab garantieren eine hohe Chargenkonstanz für alle Konzentrationen. Das direkt verwendbare Produkt ist eine homogene kolloidale Lösung, der Prolin/4-Hydroxy-Prolin Anteil ist ca. 19%.

· Literatur

1.) Bornstein, M.B. et al.; 1958; J.Biophys.Biochem.Cytol. 4, 499

2.) Miller, E.J.; 1976; Mol.Cell.Biochem. 13, 165

3.) Strom, S.C. et al.; 1982; Meth.Enzymol. 82, 544

· Bestellinformation

Artikelnummer		Einheit	ab 1	10+		20+
Z-17C03-C	ratCollagen 1, nativ (6mg/ml)	10 ml	120,00	112,00		102,10
B-L8730-I	TC-Wasser, steril, endotoxinfrei	500 ml			on quotation

Preise in € netto, ex w CELL CONCEPTS GmbH, zzgl. MWSt.. Preisänderungen ohne vorherige Ankündigung vorbehalten.

Gel - Technologie: Beispiel-Arbeitsanleitungen

· Denaturierte Gele (nach Freshney)

Prinzip der Methode: Collagenstammlösung in wässriger Carbodiimidlösung auf Arbeitskonzentration verdünnen, Kulturschalen beschichten, inkubieren, waschen, lufttrocknen, unter UV-Licht sterilisieren und sofort verwenden bzw. trocken aufbewahren. Im Einzelnen gehen Sie so vor:

- Sterile 15ml Mediumröhrchen mit je 2 mg Carbodiimid füllen, verschließen und bei 4^oC aufbewahren.

- Zum Beschichten 14ml steriles aqua bidest (Bestnr. B-L8730-I) bei RT in jedes benötigte Röhrchen mit Carbodiimid einfüllen. 1 Röhrchen reicht für die Beschichtung von 15 Schälchen a 35mm Æ.

- Jedes Röhrchen 10 Sekunden auf Vortex schütteln.

- Je nach Applikation 0,25 - 1ml Collagenstammlösung ins Röhrchen geben

- erneut schnell und gründlich auf Vortex schütteln.

- Sofort und rasch etwa 1ml pro 35mm Schälchen dieser Lösung in die Kulturschälchen füllen, bis Boden gut bedeckt ist.

- 3 Stunden bei 25^oC inkubieren.

- 3 mal mit aqua bidest (Bestnr. B-L8730-II) waschen.

- 1 Stunde bei RT lufttrocknen.

- 1 Stunde unter UV-Licht sterilisieren

- Schälchen sofort verwenden bzw. trocken aufbewahren.

· Native Gele (nach Worthington verändert)

Collagen kann auch als nicht-denaturierte native Matrix verwendet werden. Es fördert sowohl die morphologische Entwicklung und Differenzierung als auch die Expression gewebespezifischer Funktionen bei einer Reihe von Zelltypen in vitro. Um ein stabiles Gel zu erhalten, kann alternativ folgendermaßen vorgegangen werden:

- 1a) Lösung vorsichtig bei 4 - 6^oC zunächst gegen 0,075M Natrium-Citrat-Puffer pH 4,3 - 4,5 dialysieren (oder)

- 1b) Lösung schritweise bei 4 - 6^oC mit 1-fach bzw. 2-3-fach konzentriertem Medium mischen

- 2) Schrittweise (bei 1a) auf pH 7,0 mit 0,5M Natrium-Carbonat titrieren, gleichzeitig Aufwärmen auf 37^oC

- (M I T V O R S I C H T: Wenn unvermeidbar, maximal auf ca. 54^oC zur Faktoren-Inaktivierung).

Alternativ besteht auch die Möglichkeit, die Zellen vor der Erwärm- und Gelierphase in die Collagen-Lösung einzumischen und in das entstehende Gel einzuschließen. Hier muß zunächst der physiologische pH-Wert durch Titration mit Medium o.ä. eingestellt werden, bevor mit dem Gelieren durch Erwärmung begonnen wird. Um optimale Bedingungen festzulegen, bedarf es aufgrund der Unterschiedlichkeit der Zellen grundsätzlich des Experiments.

Weitere Fragen, insbesondere nach spezieller Literatur zu bestimmter Methodik und Applikation, beantworten wir, soweit es uns möglich ist, gerne gezielt, wenn Sie uns anrufen.

(vs34/12 – v.admc.art.kat.kat1.5reag.colr.pdf)